Hopp til innhold

Øvelse

Tillaging av elektroforesebuffer og agarose-gel

Til forsøket om DNA-profiler trenger dere elektroforesebuffer og agarose-gel. Dette kan lages eller kjøpes. Her er framgangsmåten for tillaging av elektroforesebuffer og agarose-gel.

LK20
Oppsett av agarose gel-elektroforese. Foto.

Forberedelse lærer (tidsbruk ca. 1 time)

Tillaging av elektroforesebuffer

Tillaging av TAE-elektroforesebuffer:

  1. Vei ut 242 gram Tris-base og 18,61 gram EDTA og løs dette i 0,5 l destillert vann.
  2. Tilsett 57,1 ml iseddik.
  3. Fyll på med destillert vann til totalt 1 liter.
  4. Bruk magnetrører for å blande den konsentrerte løsningen (50 x).
  5. Fortynn den løsningen ved å ta ut 20 ml konsentrert elektroforesebuffer (blandingsforhold 49:1).
  6. Fyll på med destillert vann til totalt 1 liter.

  7. Du har nå laget en fortynnet TAE-elektroforesebuffer (1x).

Oppbevaring: Etter bruk kan bufferen helles på en beholder og brukes flere ganger så lenge den holdes ren.

Prosessen for tillaging av TAE-elektroforesebuffer illustrert steg for seg.

Prosessen for tillaging av TAE-elektroforesebuffer illustrert steg for seg.

Tillaging og støping av agarose-gel

Prosentandelen agarose i gelen vil påvirke resultatet. Til dette forsøket anbefales 0,8 % agarose (0,8 gram agarose per 100 ml elektroforesebuffer).

  1. Vei ut ønsket mengde agarose. Dette kommer an på størrelsen på støpekaret og hvor mange geler du ønsker å lage. Ha agarosen i en erlenmeyerkolbe og tilsett fortynnet elektroforesebuffer.
  2. Kok opp under omrøring enten i vannbad eller i mikrobølgeovn. Ved oppvarming i mikrobølgeovn, kjør 1 min på høy effekt, ta ut og snurr på flasken for å blande løsningen, og kjør gjentatte ganger til all agarosen er smeltet og du har en klar løsning.
  3. La løsningen kjøle seg ned under omrøring til ca. 60 ℃. Pass på at den ikke begynner å stivne.
  4. Hell agarose-løsningen over i støpekaret, sett i kammen og la gelen stivne i 20–30 minutter.

Oppbevaring: Hvis du pakker agarose-gelen inn i plastfolie, kan den oppbevares 1–2 uker i kjøleskap. (OBS: Ikke fjern kammen.)

Tillaging av agarose-gel steg for steg. Illustrasjon.

Tillaging av agarose-gel steg for steg.

Kilde

Skolelaboratoriet for biologi, Universitetet i Oslo (u.å). Agarose gel-elektroforese. Hentet 25. oktober 2020 fra https://www.mn.uio.no/ibv/om/skolelab/nedlasting-av-undervisningsmateriell.html

Sist oppdatert 09.11.2020
Skrevet av Skolelaboratoriet for biologi, UiO og Camilla Øvstebø

Læringsressurser

Bioteknologi i praksis