Skip to content
Experiment

Forsøk: Isolering av DNA fra fiskemelke

I dette forsøket bruker vi materiale med ekstra stort DNA-innhold – melke fra fisk. Prinsippet for øvelsen er å skille oppløst DNA fra proteiner og fett, som utgjør de andre hovedkomponentene av organisk materiale i melken.
DNA har samlet seg i en tykk tråd som er synlig for det blotte øyet. Video: Scanpix, Science Photo Library / CC BY-NC-SA 4.0

Metode

Proteinene felles og denatureres ved utsalting og varmebehandling, mens fettstoffene løses i kloroform. Etter sentrifugeringen får vi så en klar vandig løsning, som i tillegg til salter også inneholder det løste DNA-et.

DNA-et felles så ut i absolutt alkohol. Vi kan også bruke rødsprit. Vi bør ha tynne, høye reagensrør med sprit, slik at DNA-dråpene får en lang vei å «falle» ned gjennom røret. Dette gjør at vi tydelig ser den trådaktige utfellingen.

Flere lag kan samarbeide om en stamløsning (til og med punkt 5). Det er viktig å bearbeide melken godt for at resultatet skal bli best mulig.

Fiskemelke

Fiskemelke kan du samle selv fra fisk som du fanger i den perioden da melken er moden og flytende, eller du kan kjøpe hos utstyrsleverandører. Melken kan gjerne oppbevares frossen og holder seg i flere år.

Utstyr og løsninger
  • 2 ml engangsprøyte uten kanyle
  • lite begerglass (50 ml)
  • reagensrør (høyt)
  • glasstav
  • sentrifugerør
  • melke (kan for eksempel kjøpes fra www.biokonsult.no)
  • 10 % Zalo, mettet NaCl-løsning
  • Kloroform (triklormetan) Sikkerhetsdatablad fra ThermoFisher Scientific
  • absolutt alkohol
  • kokende vannbad
  • sentrifuge
  • hansker
  • avtrekksskap eller punktavsug

Framgangsmåte

  1. Fyll 0,5–1 ml melke i en 2 ml sprøyte uten kanyle. Unngå å ta med hinner fra melkeposen.
  2. Press melken gjennom sprøyten 3–4 ganger for å homogenisere væsken.
  3. Tilsett 10 ml vann og bland melken godt.
  4. Tilsett 1 ml 10 % Zalo. Spermiene løser seg nå opp, og du får en gelé av DNA og protein.
  5. Tilsett 20 ml mettet NaCl-løsning og bland godt.
  6. Ta ut 5 ml av denne løsningen og sett den i kokende vannbad i 5–10 min.
  7. Løsningen kjøles og tilsettes 5 ml kloroform. Rist godt i 2–3 min. Bruk tett topp og/eller hansker. Bruk avtrekksskap eller punktavsug når du jobber med kloroform.
  8. Sentrifuger i 10 minutter.
  9. Legg forsiktig en dråpe av DNA-løsningen i overflaten på et høyt reagensrør med alkohol. DNA-et felles ut som fibre.
  10. Tvinn DNA-fibrene opp på en glasstav.

OBS: Ikke kast kloroformen i vasken etterpå. Følg lærerens instruksjoner.

Dokumentasjon

Bruk mobilkamera til å dokumentere prosessen. Noter resultater underveis og bruk gjerne rapportgeneratoren til å føre forsøksrapporten.