Tillaging av elektroforesebuffer og agarose-gel

Tillaging av elektroforesebuffer

Tillaging av TAE-elektroforesebuffer:

1. Vei ut 242 gram Tris-base og 18,61 gram EDTA og løs dette i 0,5 l destillert vann.
2. Tilsett 57,1 ml iseddik.
3. Fyll på med destillert vann til totalt 1 liter.
4. Bruk magnetrører for å blande den konsentrerte løsningen (50 x).
5. Fortynn den løsningen ved å ta ut 20 ml konsentrert elektroforesebuffer (blandingsforhold 49:1).

6. Fyll på med destillert vann til totalt 1 liter.

7. Du har nå laget en fortynnet TAE-elektroforesebuffer (1x).

Oppbevaring: Etter bruk kan bufferen helles på en beholder og brukes flere ganger så lenge den holdes ren.

Tillaging og støping av agarose-gel

Prosentandelen agarose i gelen vil påvirke resultatet. Til dette forsøket anbefales 0,8 % agarose (0,8 gram agarose per 100 ml elektroforesebuffer).

1. Vei ut ønsket mengde agarose. Dette kommer an på størrelsen på støpekaret og hvor mange geler du ønsker å lage. Ha agarosen i en erlenmeyerkolbe og tilsett fortynnet elektroforesebuffer.
2. Kok opp under omrøring enten i vannbad eller i mikrobølgeovn. Ved oppvarming i mikrobølgeovn, kjør 1 min på høy effekt, ta ut og snurr på flasken for å blande løsningen, og kjør gjentatte ganger til all agarosen er smeltet og du har en klar løsning.
3. La løsningen kjøle seg ned under omrøring til ca. 60 ℃. Pass på at den ikke begynner å stivne.
4. Hell agarose-løsningen over i støpekaret, sett i kammen og la gelen stivne i 20–30 minutter.

Oppbevaring: Hvis du pakker agarose-gelen inn i plastfolie, kan den oppbevares 1–2 uker i kjøleskap. (OBS: Ikke fjern kammen.)

Skolelaboratoriet for biologi, Universitetet i Oslo (u.å). Agarose gel-elektroforese. Hentet 25. oktober 2020 fra https://www.mn.uio.no/ibv/om/skolelab/nedlasting-av-undervisningsmateriell.html