Metode
Proteina blir felte og denaturert ved utsalting og varmebehandling, mens fettstoffa blir løyste i kloroform. Etter sentrifugeringa får vi så ein klar vasshaldig løysning, som i tillegg til salt også inneheld det løyste DNA-et.
DNA-et blir så felt ut i absolutt alkohol. Vi kan også bruke raudsprit. Vi bør ha tynne, høge reagensrøyr med sprit, slik at DNA-dropane får ein lang veg å «falle» ned gjennom røyret. Dette gjer at vi tydeleg ser den trådaktige utfellinga.
Fleire lag kan samarbeide om ein stamløysning (til og med punkt 5). Det er viktig å arbeide godt med mjølka for at resultatet skal bli best mogleg.
Fiskemjølke
Fiskemjølke kan du samle sjølv frå fisk som du fangar i den perioden då mjølka er moden og flytande, eller du kan kjøpe hos utstyrsleverandørar. Mjølka kan gjerne oppbevarast frossen og held seg i fleire år.
Utstyr og løysningar
- 2 ml eingongsprøyte utan kanyle
- lite begerglas (50 ml)
- reagensrøyr (høgt)
- glas-stav
- sentrifugerøyr
- mjølke (kan til dømes kjøpast frå www.biokonsult.no)
- 10 % Zalo, metta NaCl-løysning
- kloroform (triklormetan) Datatryggleiksblad frå ThermoFisher Scientific
- absolutt alkohol
- kokande vassbad
- sentrifuge
- hanskar
- avtrekksskap eller punktavsug
Framgangsmåte
- Fyll 0,5–1 ml mjølke i ei 2 ml sprøyte utan kanyle. Unngå å ta med hinner frå mjølkeposen.
- Press mjølka gjennom sprøyta 3–4 gonger for å homogenisere væska.
- Tilset 10 ml vatn og bland mjølka godt.
- Tilset 1 ml 10 % Zalo. Spermiane løyser seg no opp, og du får ein gelé av DNA og protein.
- Tilset 20 ml metta NaCl-løysning og bland godt.
- Ta ut 5 ml av denne løysningen og sett han i kokande vassbad i 5–10 minutt.
- Løysningen blir kjølt og tilsett 5 ml kloroform. Rist godt i 2–3 minutt. Bruk tett topp og/eller hanskar. Bruk avtrekksskap eller punktavsug når du jobbar med kloroform.
- Sentrifuger i 10 minutt.
- Legg forsiktig ein drope av DNA-løysningen i overflata på eit høgt reagensrøyr med alkohol. DNA-et blir felt ut som fibrar.
- Tvinn DNA-fibrane opp på ein glas-stav.
OBS: Ikkje kast kloroformen i vasken etterpå. Følg læraren sine instruksjonar.
Dokumentasjon
Bruk mobilkamera til å dokumentere prosessen. Noter resultat undervegs og bruk gjerne rapportgeneratoren til å føre forsøksrapporten.