Metode
Proteinene felles og denatureres ved utsalting og varmebehandling, mens fettstoffene løses i kloroform. Etter sentrifugeringen får vi så en klar vandig løsning, som i tillegg til salter også inneholder det løste DNA-et.
DNA-et felles så ut i absolutt alkohol. Vi kan også bruke rødsprit. Vi bør ha tynne, høye reagensrør med sprit, slik at DNA-dråpene får en lang vei å «falle» ned gjennom røret. Dette gjør at vi tydelig ser den trådaktige utfellingen.
Flere lag kan samarbeide om en stamløsning (til og med punkt 5). Det er viktig å bearbeide melken godt for at resultatet skal bli best mulig.
Fiskemelke
Fiskemelke kan du samle selv fra fisk som du fanger i den perioden da melken er moden og flytende, eller du kan kjøpe hos utstyrsleverandører. Melken kan gjerne oppbevares frossen og holder seg i flere år.
Utstyr og løsninger
- 2 ml engangsprøyte uten kanyle
- lite begerglass (50 ml)
- reagensrør (høyt)
- glasstav
- sentrifugerør
- melke (kan for eksempel kjøpes fra www.biokonsult.no)
- 10 % Zalo, mettet NaCl-løsning
- Kloroform (triklormetan) Sikkerhetsdatablad fra ThermoFisher Scientific
- absolutt alkohol
- kokende vannbad
- sentrifuge
- hansker
- avtrekksskap eller punktavsug
Framgangsmåte
- Fyll 0,5–1 ml melke i en 2 ml sprøyte uten kanyle. Unngå å ta med hinner fra melkeposen.
- Press melken gjennom sprøyten 3–4 ganger for å homogenisere væsken.
- Tilsett 10 ml vann og bland melken godt.
- Tilsett 1 ml 10 % Zalo. Spermiene løser seg nå opp, og du får en gelé av DNA og protein.
- Tilsett 20 ml mettet NaCl-løsning og bland godt.
- Ta ut 5 ml av denne løsningen og sett den i kokende vannbad i 5–10 min.
- Løsningen kjøles og tilsettes 5 ml kloroform. Rist godt i 2–3 min. Bruk tett topp og/eller hansker. Bruk avtrekksskap eller punktavsug når du jobber med kloroform.
- Sentrifuger i 10 minutter.
- Legg forsiktig en dråpe av DNA-løsningen i overflaten på et høyt reagensrør med alkohol. DNA-et felles ut som fibre.
- Tvinn DNA-fibrene opp på en glasstav.
OBS: Ikke kast kloroformen i vasken etterpå. Følg lærerens instruksjoner.
Dokumentasjon
Bruk mobilkamera til å dokumentere prosessen. Noter resultater underveis og bruk gjerne rapportgeneratoren til å føre forsøksrapporten.